1.筛成分——UHPLC-MS/MS鉴定复方成分,锁定四个核心活性分子。
2.找靶点——网络药理学预测成分靶点,与POI疾病靶点取交集,富集分析锁定PI3K/AKT通路及AKT1/TP53核心靶点,分子对接验证结合能力。
3.做体内模型——CTX诱导POI小鼠,YLYCF灌胃治疗,从动情周期、激素水平、卵泡计数、妊娠率评价药效,并用AKT抑制剂和p53激活剂做救援实验反向验证。
4.做体外模型——CTX刺激KGN颗粒细胞,含药血清干预,测增殖、凋亡和p53入核,复现体内保护效应。
5.看机制——Western blot检测通路蛋白变化,体内外交叉验证,抑制剂救援实验证明药效依赖PI3K/AKT/p53通路完整性。
6.下结论——整合数据形成“复方成分→信号通路→细胞命运→器官功能→生殖结局”的完整证据链。