1. LINC00641 在肺腺癌中低表达，与不良预后相关
TCGA 数据库分析显示，与正常肺组织相比，LINC00641 在肺腺癌组织中表达显著下调，且其低表达与肿瘤 TNM 晚期分期显著相关（图 1A-B）。Kaplan-Meier 生存分析证实，LINC00641 低表达患者的无复发生存期显著缩短，校正临床混杂因素后，LINC00641 低表达仍是肺腺癌患者不良预后的独立危险因素（图 1C）。分子特征鉴定显示，LINC00641 全长 3185nt，无蛋白编码潜力，主要定位于肺腺癌细胞核（图 1D-G），为其发挥核内调控功能奠定基础。
2. m⁶A 阅读器 YTHDC1 调控 LINC00641 稳定性
通过 SRAMP 工具预测及 MeRP-qPCR 实验证实，LINC00641 序列中存在 3 个潜在 m⁶A 修饰位点，且在 A549、H1299 细胞中均存在明确的 m⁶A 修饰（图 2A-B）。GEPIA 数据库分析发现，核内 m⁶A 阅读器 YTHDC1 与 LINC00641 表达呈显著正相关，RIP-qPCR 实验验证 YTHDC1 可直接结合 LINC00641（图 2C-D）。功能实验表明，敲低 YTHDC1 不影响整体 m⁶A 水平，但会加速 LINC00641 降解，显著降低其表达；而 m⁶A 修饰位点突变会减弱 LINC00641 的稳定性（图 2E-H），证实 YTHDC1 通过识别 LINC00641 的 m⁶A 修饰维持其表达稳定。
3. LINC00641 抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭及体内肿瘤进展
细胞功能实验显示，敲低 LINC00641 可显著增强 A549、H1299 细胞的增殖能力与克隆形成效率（图 3A-C），同时促进细胞迁移与侵袭（图 3D）。体内实验中，LINC00641 敲低组裸鼠皮下瘤生长速度显著加快（图 3E），肺转移模型中肺表面转移结节数量增多、体积增大，小动物 micro-CT 及 H&E 染色均证实转移灶显著进展（图 3F-H）。上述结果明确 LINC00641 在肺腺癌中发挥抑癌作用，其低表达促进肿瘤生长与转移。
4. LINC00641 结合 HuR 蛋白，调控 CDH2 介导的 EMT
通过 catRAPID 与 RNAinter 数据库预测及实验验证，LINC00641 可与 RNA 结合蛋白 HuR 直接相互作用，结合位点为 LINC00641 的 1891-3185nt 片段中的 ATTTA 基序（图 4A-C）。敲低 LINC00641 可显著升高 HuR 蛋白水平，且主要促进其在细胞质中的积累（图 4D-F）；而敲低 HuR 可部分逆转 LINC00641 缺失介导的细胞迁移增强效应（图 4G），提示 HuR 是 LINC00641 的关键下游效应分子。
进一步研究发现，CDH2 是 LINC00641-HuR 轴的直接靶基因。HuR 可结合 CDH2 mRNA 并增强其稳定性，LINC00641 敲低后，胞浆 HuR 积累进一步稳定 CDH2 mRNA，导致 N - 钙粘蛋白（CDH2 编码产物）表达上调，最终促进 EMT 进程（图 5A-H）。RNA 测序与 GSEA 分析证实，LINC00641 敲低细胞中 EMT 相关基因显著富集，明确 EMT 是 LINC00641 发挥抑癌作用的核心通路。
5. LINC00641 低表达增强肺腺癌细胞对铁死亡的敏感性
KEGG 分析显示，LINC00641 敲低细胞中铁死亡相关通路显著富集（图 6A）。Cancer Therapeutics Response Portal 数据库分析发现，CDH2 表达与铁死亡诱导剂（RSL3、ML162 等）敏感性呈负相关（图 6B）。功能实验证实，敲低 LINC00641 可显著降低 A549 细胞对 RSL3、Erastin 的 IC50 值，增强铁死亡标志物 PTGS2 的表达（图 6C-E）；同时，细胞内活性氧（ROS）、亚铁离子（Fe²⁺）及总铁浓度显著升高（图 6F-H）。代谢组学检测显示，LINC00641 敲低后花生四烯酸（AA）代谢增强，而 AA 与 IFN-γ 协同处理可进一步增强细胞铁死亡敏感性（图 6I-J），提示 LINC00641 低表达为肺腺癌提供了铁死亡治疗靶点。
