IF48.5!武汉大学团队“国自然+多组学”登顶《Nature》!揭示MASH新靶点GPNMB-RYK轴!思路详解!

GPNMB可被切割释放胞外域G-ECD。团队通过定点突变获得切割缺陷型L482G，构建四种变体回补至敲除小鼠肝脏【图1a】。

结果显示，回补全长、△CTD和G-ECD均可恢复MASH，而L482G不能【图1e-i】。单纯过表达G-ECD即足以驱动MASH，证明分泌型G-ECD是真正的致病形式。

图1：分泌型G-ECD是MASH的关键驱动因子

团队通过RNA测序发现MASH小鼠肝脏中Gpnmb上调最显著。全身性或肝细胞特异性敲除Gpnmb均可减轻脂肪变性、炎症和纤维化【图2d-g】。

利用细胞表面文库筛选及AAV8-shRNA敲低实验，证实RYK是G-ECD的功能性受体，敲低Ryk可显著保护小鼠免受MASH侵害【图2】。

图2：RYK是GPNMB受体，为MASH发展所必需

构建肝细胞特异性G-ECD转基因小鼠后MASH表型加重，但敲低Ryk后G-ECD的致病效应被完全消除【图3c-e】。

双敲除实验表明，单独敲除Ryk即可阻断GPNMB过表达驱动的MASH，从遗传学证实RYK是G-ECD驱动MASH不可或缺的受体【图3h-j】。

图3：肝细胞RYK是G-ECD驱动MASH所必需的

RNA-seq显示Gpnmb敲除后脂代谢通路显著下调【图4a-b】。蛋白印迹证实MASH小鼠肝脏p-ERK1/2升高，Gpnmb敲除后消失【图4d】。

使用U0126或敲低ERK1/2均可阻断G-ECD诱导的靶基因表达，G-ECD处理10分钟后p-ERK1/2迅速升高【图4e-i】。

G-ECD疫苗可预防MASH【图5c-g】；中和抗体可逆转已建立的MASH【图5j-n】；GalNAc-siGpnmb实现肝靶向治疗，每月一次即可逆转MASH【图5q-u】。三种策略均验证了靶向GPNMB-RYK轴的治疗潜力。